Quantifizierung von Kupfer(II)-ionen in Zellen Quantitatives Arbeiten mit GFP durch Fluoreszenzlebensdauermikroskopie

In der Biologie ist das Grun Fluoreszierende Protein (GFP) ein wichtiges Werkzeug. GFP spielt z. B. bei der Beobachtung der Genexpression sowie in der Lokalisierung und der Untersuchung von Wechselwirkungen von Proteinen eine wichtige Rolle. Fur das quantitative Arbeiten mit GFP, wie es sich bei dessen Einsatz als Biosensor ergibt, fuhrt das zu Fragestellungen, die weiterreichende Untersuchungen erfordern. Nach einer Ubersicht uber die aktuellen Anwendungen wird eine Methode entwickelt, mit der die Fluoreszenzlebensdauermikroskopie an GFP als Sensor fur zweiwertige Kupferionen eingesetzt werden kann. Anhand der Entwicklung eines mathematischen Modells kann durch die Betrachtung der Lebensdauer von GFP die Konzentration der Kupferionen bestimmt werden. Durch die Moglichkeit ortsaufgeloster Messungen eignet sich dieses Verfahren zur Untersuchung der Konzentration an Kupferionen in Zellen. Es werden Beispiele in E. coli und in Tabakzellen gezeigt. Ausserdem wird ein Verfahren beschrieben, das uber die Messung der Lebensdauer die Bestimmung der Bildungseffizienz von GFP erlaubt."