Structure - Fonction D'Une Atpase de Type P

La comprehension au niveau atomique du mecanisme de transport des ions calcium par une ATPase de type P, la Ca-ATPase, necessite la caracterisation structurale des differentes conformations mises en evidence par les etudes fonctionnelles. Si differents cristaux existent pour les formes non-phosphoryle, nous ne disposions pas jusqu'a ce jour de cristaux d'une forme phosphorylee covalente. La formation de ce derive necessite d'avoir une Ca-ATPase marquee par une sonde fluorescente. La stabilite du derive est mise en evidence a l'aide de 32P]acetylphosphate. Des cristaux 2D de type tubulaire sont produits et apres un traitement d'images de cryomicroscopie electronique, la structure 3D d'un derive phosphoryle covalent d'une ATPase de type P a 8A de resolution a ete generee. La comparaison de cette nouvelle structure avec les autres structures existantes suggere des modifications au niveau ou positionnement des domaines cytoplasmiques. Des experiences de trypsinisation et de chromatographie sur une colonne Red120, ont permis d'affiner ces observations. Les liens entre ces modifications structurales et le mecanisme de transport de calcium couple a l'hydrolyse d ATP sont discutes."